Анотація до роботи:

Філяк Є. З. Протеоміка Т-лімфоцитів миші дикого типу та за відсутності гена білка секурину. – Рукопис

Дисертація на здобуття наукового ступеня кандидата біологічних наук за спеціальністю 03.00.11 – цитологія, клітинна біологія, гістологія, Інститут біології клітини НАН України, м.Львів, 2007.

Дисертаційна робота присвячена дослідженню впливу відсутності гену pttg на активацію Т-лімфоцитів миші та на регуляторні системи клітини, відповідальні за індукцію імунної відповіді органіму на патоген. Встановлено, що нокаут по гену pttg зумовлює зниження рівня бласт-трансформації Т-лімфоцитів миші у відповідь на активацію мітогенами та затримку цих клітин на стадії S клітинного циклу. За допомогою методів протеоміки ідентифіковано 18 білків, експресія яких достовірно змінена в активованих Т-лімфоцитів без гену pttg у порівнянні із активованими Т-лімфоцитами дикого типу. Показано, що активовані
Т-лімфоцити із нокаутом по гену pttg продукують достовірно більшу кількість інтерферону-гамма, та достовірно меншу кількість інтерлейкіну-4, що у свою чергу може призводити до порушення балансу активності імунної відповіді типів Th1 та Th2.

У дисертаційній роботі вперше отримано неопосередковані дані щодо ролі білку PTTG (секурину) у регуляції активації Т-лімфоцитів та контролю імунної відповіді організму на антиген. Вперше вивчено вплив нокауту по гену pttg на активацію Т-лімфоцитів, зокрема на регуляторні шляхи цих клітин, відповідальні за їх активацію. Показано, що відсутність гену pttg призводить до порушення балансу конкурентної продукції інтерферону гамма та інтерлейкіну-4, відповідальних за активацію імунної відповіді Th1 та Th2 типу. На основі отриманих даних, сформульовано наступні висновки:

1. Нокаут по гену pttg пригнічує CD3/TCR-залежну бласттрансформацію Т-лімфоцитів.

   Відсутність гену pttg зумовлює зростання на 28 % рівня продукції мРНК білка c-Myc активованими Т-лімфоцитами.

   Відсутність гену pttg спричинює до затримки Т-лімфоцитів на стадії S клітинного циклу за рахунок зменшення відносної кількості клітин, які перебувають у фазах G0/G1 та G2/M клітинного циклу.

   Відсутність гену pttg у Т-лімфоцитах не викликала статистично достовірних змін у кількості апоптичних клітин.

   Нокаут по гену білка PTTG достовірно змінює кількість принаймні 36 білків у активованих Т-лімфоцитах. Ідентифіковано 18 білків, експресія яких була змінена в активованих Т-лімфоцитах мишей, нокаутних по гену pttg, у порівнянні із активованими
   Т-лімфоцитами мишей дикого типу.

   Активовані Т-лімфоцити мишей із нокаутом гену pttg, продукують підвищену кількість інтерферону-гамма (10245 пг/мл на 10⁷ клітин) у порівнянні із активованими
   Т-лімфоцитами мишей дикого типу (6089 пг/мл на 10⁷ клітин).

   Нокаут по гену pttg спричинює статистично достовірне пригнічення продукції Інтерлейкіну-4 (106 пг/мл на 10⁷ клітин) активованими Т-лімфоцитами без гену pttg у порівнянні із Т-лімфоцитами дикого типу (366 пг/мл на 10⁷ клітин).

   Трансформуючий фактор росту бета-1 викликає пригнічення продукції інтерферону-гамма як активованими Т-лімфоцитами дикого типу (до рівня 240 пг/мл на 10⁷ клітин), так і активованими Т-лімфоцитами без гену pttg (до 120 пг/мл на 10⁷ клітин). Трансформуючий фактор росту бета-1 зумовлював також пригнічення продукції інтерлейкіну-4 активованими
   Т-лімфоцитами дикого типу та активованими Т-лімфоцитами із нокаутом по гену pttg (до рівня 22,6 пг/мл на 10⁷ клітин і 23 пг/мл на 10⁷ клітин, відповідно).

   Основні публікації за темою дисертації

   1. Дефіцит гену білка секурину (PTTG) знижує рівень активації Т лімфоцитів, індукованої лектином / Філяк Є.З., Філяк О.С., Афанасьєв С.В., Стойка Р.С. // Експериментальна та клінічна фізіологія та біохімія. – 2006. – №4. – С. 51-55 (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду, проведення активації Т-лімфоцитів, проведення досліджень, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті).

   2. Філяк Є.З., Філяк О.С., Стойка Р.С. Дослідження впливу дефіциту гену pttg на продукцію інтерлейкіну-6 активованими Т-лімфоцитами миші // Клінічна та експериментальна патологія. – 2007. – Т. VI, № 1. – С. 148 - 150. (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду, проведення активації Т-лімфоцитів, проведення досліджень, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті).

   3. Втрата гену білка секурину (PTTG) веде до пригнічення активації Т лімфоцитів / Філяк Є.З., Держко І.О., Філяк О.С., Стойка Р.С. // Медична хімія. – 2007. - № 1. – С. 101 - 104. (Дисертанту належить підготовка зразків для досліду, проведення активації Т-лімфоцитів, проведення досліджень, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті).

   4. Протеоміка активації Т лімфоцитів мишей, позбавлених гена pttg / Філяк Є.З., Філяк О.С., Сушельницький С. І., Стойка Р.С. // Доп. НАН України. – 2007. - № 5. – С. 172-179. (Дисертанту належить підготовка зразків для дослідів, проведення досліджень, пошук та аналіз даних літератури, участь в аналізі результатів та написання статті).

   5. Filyak Ye., Filyak O., Souchelnytskyi S. Proteomics-based study of mechanisms for TGF-beta1-induced inhibition of T-lymphocyte functions // 9-ий з’їзд Українського біохімічного товариства. – Харків. – Жовтень 24-27, 2006. – С. 189 (Дисертант брав участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні тез, презентував роботу на конференції. Дана доповідь була відзначена першою премією.)

   6. Proteomics-based search of proteins involved in PTTG-dependent regulation of
   T-lymphocyte activation / Ye. Filyak, O. Filyak, S. Souchelnytskyi, R. Stoika // 6^th International Parnas Conference. – Krakow, Poland. – May, 30 – June, 2 2007. – P. 43 (Дисертант брав участь у проведенні досліджень, статистичній обробці результатів, аналізі експериментальних даних, написанні та оформленні тез, презентував роботу на конференції.)